①自身引導合成法 ②置換合成法 ③PCR合成法 ④快速擴增cDNA末端法 ⑤雙鏈cDNA末端的處理 ⑥cDNA與載體的連接
主要原因有:酶濃度太高;高PH;低鹽;含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金屬離子;甘油濃度高于5%;存在某些有機溶劑。