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【簡(jiǎn)答題】
四膜蟲(chóng)是一種雙核有纖毛的原生動(dòng)物。小核（微核）含有細(xì)胞染色體的主要拷貝，它參與細(xì)胞的性接合，而并不在通常的基因表達(dá)中起作用。大核（巨核）含有細(xì)胞基因組的“工作”拷貝，由大量基因大小的雙鏈 DNA 片段（微染色體）組成，它們活躍地進(jìn)行著轉(zhuǎn)錄。含有核糖體 RNA基因的微染色體拷貝數(shù)很多，可以用梯度離心進(jìn)行分離。在電子顯微鏡下檢查，每一個(gè)核糖體微染色體是一種長(zhǎng)為 21kb 的線性結(jié)構(gòu)。進(jìn)行凝膠電泳時(shí)，核糖體微染色體的遷移也是 21kb（圖 3 的第一泳道）。但是，如果用限制性內(nèi)切核酸酶BglⅡ切割微染色體，產(chǎn)生的兩個(gè)片段（13.4kb 和 3.8kb）的總和不等于 21kb（圖3的第二泳道），改用其他的限制性內(nèi)切核酸酶切割，所產(chǎn)生的限制性片段的總和也都小于 21kb，并且不同種酶切割產(chǎn)生的片段總和都不一樣。如果把未經(jīng)切割的微染色體先進(jìn)行變性和復(fù)性處理，然后再進(jìn)行凝膠電泳，所得到的雙鏈 DNA片段只有 10．5kb（圖 3 第三泳道）；與此相似的是，將 BglⅡ切割的微染色體進(jìn)行變性和復(fù)性，電泳后，13．4kb的片段被 6．7kb 的片段所取代 （圖 3 第四泳道）。請(qǐng)解釋為什么限制性片段的總長(zhǎng)度不等于 21kb？為什么變性和復(fù)性之后電泳的結(jié)果有所改變？對(duì)于核糖體微染色體中的總序列組成你有什么看法？
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【案例分析題】
用 BamHI切割一重組質(zhì)粒 DNA 分子并從中分離純化了兩個(gè) DNA片段，一段長(zhǎng)400bp，另一段長(zhǎng) 900bp?，F(xiàn)在希望將這兩個(gè)片段重新連接起來(lái)，得到如圖 1 所示的結(jié)果。
于是將這兩種片段混合起來(lái)，并在連接酶的存在下進(jìn)行溫育，分別在 30 分鐘和 8 小時(shí)取樣進(jìn)行凝膠電泳分析，令人驚訝的是，連接產(chǎn)物并非是理想中的 1．3kb的重組分子，而是一種復(fù)雜的片段模式（圖 A）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著溫育時(shí)間的延長(zhǎng)，較小片段的濃度逐漸降低，大片段的濃度逐漸增加。如果用 BamHI來(lái)切割連接后的混合物，則起始的片段可以重新產(chǎn)生（圖 A）。
從凝膠中分離純化出 1．3kb 的片段，并取出一部分用 BamHI進(jìn)行切割，以檢查它的結(jié)構(gòu)。正如預(yù)料的一樣，出現(xiàn)了兩個(gè)原始的帶（圖 B）。但是用 EcoRI切割另一部分樣品，希望能夠產(chǎn)生兩個(gè) 300bp 和一個(gè)長(zhǎng)度為 700bp 的核苷酸片段，然而，凝膠電泳的結(jié)果，令人驚奇（圖 B）。
由于任意兩個(gè) BamHI末端可以連接，甚至同一大小的片段也有幾種不同的結(jié)構(gòu)(如圖A22．1 中的1.3kb ...
【案例分析題】
用 BamHI切割一重組質(zhì)粒 DNA 分子并從中分離純化了兩個(gè) DNA片段，一段長(zhǎng)400bp，另一段長(zhǎng) 900bp?，F(xiàn)在希望將這兩個(gè)片段重新連接起來(lái)，得到如圖 1 所示的結(jié)果。
于是將這兩種片段混合起來(lái)，并在連接酶的存在下進(jìn)行溫育，分別在 30 分鐘和 8 小時(shí)取樣進(jìn)行凝膠電泳分析，令人驚訝的是，連接產(chǎn)物并非是理想中的 1．3kb的重組分子，而是一種復(fù)雜的片段模式（圖 A）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著溫育時(shí)間的延長(zhǎng)，較小片段的濃度逐漸降低，大片段的濃度逐漸增加。如果用 BamHI來(lái)切割連接后的混合物，則起始的片段可以重新產(chǎn)生（圖 A）。
從凝膠中分離純化出 1．3kb 的片段，并取出一部分用 BamHI進(jìn)行切割，以檢查它的結(jié)構(gòu)。正如預(yù)料的一樣，出現(xiàn)了兩個(gè)原始的帶（圖 B）。但是用 EcoRI切割另一部分樣品，希望能夠產(chǎn)生兩個(gè) 300bp 和一個(gè)長(zhǎng)度為 700bp 的核苷酸片段，然而，凝膠電泳的結(jié)果，令人驚奇（圖 B）。
